疾病发生的原因(病因)是指引起疾病必不可少的、特异性的、决定疾病特征的因素。病因种类繁多，可大致归纳为以下几大类。
(一)生物性因素
生物性因素是一类最常见的病因，包括病原微生物和寄生虫。另外，由于生态环境的改变，某些原本存在于野生动物体内的病原体也可以感染人类，可能还会出现新的或变异的病原体威胁人类健康。病原体的致病力强弱不仅取决于侵入机体的数量、侵袭力和毒力，还与机体的防御功能特别是免疫力密切相关。
(二)理化因素
物理因素有异常的温度、气压、机械力、电离辐射、紫外线和噪声等;化学因素有强酸、强碱、化学毒物或动植物毒性物质等。理化因素致病，主要由因素自身的强度或浓度、作用部位、持续时间等决定，发病原因往往比较明确，机体的防御功能对其发生影响不大。
(三)营养因素
糖类、蛋白质、脂肪、维生素、无机盐(饵、锅、钙、镇、磷、氯)等，某些微量元素(如铁、氟、晒、锤、锦、腆等)以及膳食纤维素等是维持人体正常生命活动所必需的营养素，氧、水是维持生命活动的基本物质。上述物质的摄人不足或过度都可以引起疾病。土壤缺腆导致腆缺乏病; 生热营养素糖类、蛋白质、脂肪摄入不足可导致营养不良，摄人过剩可导致肥胖及代谢性疾病;维生素B ，摄入不足引起脚气病;维生素D 和Ca2 + 缺乏可引起何倭病，但摄人过度又可导致中毒。
(四)遗传性因素
遗传性因素是指生殖细胞基因的突变或染色体畸变等遗传物质的异常，而且异常遗传物质可传给子代。基因突变可导致相应蛋白质的结构和功能改变而引起疾病，如血友病、半乳糖血症、白化病等。染色体畸变所引起的先天性愚型、性染色体畸变导致的两性畸形等。某些遗传性因素可以提高个体对病因的敏感性，而使个体更易患病的现象称为
遗传易感性，其家族成员具有易患某种疾病的倾向，如精神分裂症、肥胖、糖尿病和肿瘤等。
(五)先天性因素
先天性因素指能够损害胎儿正常发育的有害因素。由先天性因素引起的疾病称为先天性疾病，如妇女娃振期病毒感染可引起先天性心脏病。先天性疾病一般是不会遗传的，但也有些先天性疾病可能存在遗传性，如唇裂、多指(趾)等。
(六)免疫因素
机体免疫反应低下、缺陷，免疫反应过强或产生自身免疫反应等免疫因素均可导致疾病发生。人类免疫缺陷病毒C human immunodeficiency virus , HIV) 感染后， 病毒侵人T 淋巴细胞，破坏T 淋巴细胞及其功能，引起获得性免疫缺陷综合征Cacquiredimmunodeficiency syndrome , AIDS); 异种血清蛋白(破伤风抗毒素等)、药物(青霉素等)所
引起的过敏性休克;花粉、食物(虾、牛乳等)所引起的支气管哮喘;机体对自身抗原发生免疫反应并引起自身组织的损害，称为自身免疫性疾病Cautoi m mune disease) ，如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、慢性溃殇性结肠炎、慢性淋巴细胞性甲状腺炎等。
Ct) 心理、社会因素
随着医学模式由生物- 医学模式转变为生物- 心理· 社会医学模式，心理和社会因素在疾病发生和发展中的作用越来越受到重视，工作、学习所产生的心理压力、人际关系不良、焦虑、孤独和情绪异常以及重大自然灾害和生活事件的打击等，都可以通过一定的途径影响机体的功能、代谢和形态结构。如高血压、消化性愤殇、肿瘤及冠心病等， 其发生和发展与心理、社会因素密切相关。综上所述， 引起疾病的病因是多种多样的，疾病的发生可以主要由一种病因引起， 也可以由多种病因同时作用或先后参与。在疾病发生、发展过程中病因作用机制是错综复杂的，因此对疾病的病因预防要具体分析和个性化防治。目前， 仍存在一些疾病的病因不完全明了和新的疾病不断出现，有待医学科学进一步阐明这些疾病的病因。

（1）右心室梗死伴急性右心衰竭　　1）扩容治疗：706羧甲淀粉、低分子右旋糖酐或生理盐水。　　2）禁用利尿剂、吗啡和硝酸甘油等血管扩张剂，以避免进一步降低右心室充盈压。　　（2）急性大块肺栓塞所致急性右心衰竭　　1）止痛：吗啡或哌替啶。　　2）溶栓治疗：尿激酶→肝素→华法林　　常用尿激酶或人重组组织型纤溶酶原激活剂（rt-PA）。停药后应继续肝素治疗。用药期间监测凝血酶原时间，使之延长至正常对照的1.5～2.0倍。持续滴注5～7天，停药后改用华法林口服数月。　　（3）右侧心瓣膜病所致急性右心衰竭　　右心衰竭的治疗主要应用利尿剂，以减轻水肿；

随着医学科学的发展，对疾病发生机制的认识从系统水平、器官水平、细胞水平逐步深入到分子水平。疾病发生的基本机制包括神经机制、体液机制、细胞机制和分子机制四个方面。
(一)神经机制
神经系统对维持和调控正常人体生命活动起主导作用，可以根据体内外环境情况调整机体各系统代谢的平衡。因此，很多致病因素可以影响神经系统的变化，从而引起疾病的发生。如烧伤时，由于疼痛和体液丢失，通过感觉神经和颈动脉及主动脉弓压力感受器，引起交感神经的强烈兴奋，达到对全身组织器官血流和代谢功能的调节。有些病因可
直接损害神经系统，如乙型脑炎病毒可直接破坏神经组织。长期精神紧张、焦虑、烦恼可导致大脑皮质功能紊乱， 丘脑和下丘脑功能失调，可导致内脏器官功能障碍。
(二)体液机制
体液机制主要是指病因直接或间接影响体液的质和量，造成内环境紊乱而引起疾病发生。体液量的严重减少，如大失血、严重脱水可导致休克;体液质的改变，如羊水、组织因子和蛇毒等促凝血物质人血，可引起凝血系统广泛激活而导致弥散性血管内凝血。感染和创伤等产生大量的炎症介质，引起炎症反应。体液因子包括可作用于全身的组胶、儿
茶酣胶、前列腺素、激活的补体、凝血因子、纤溶物质等和一般作用于局部的内皮素、某些神经肤及细胞因子等。体液性因子作用方式包括内分泌、旁分泌和自分泌三种。体液机制与神经机制密切相关，常常同时发生，共同参与疾病的发生、发展，故又称之为神经·体液机制。例如，休克使交感神经强烈兴奋，剌激肾上腺髓质释放肾上腺素，
因肾小动脉收缩，促使肾素-血管紧张素- 醒罔酣系统激活。交感神经兴奋和血液中儿茶酣胶、肾素、血管紧张素等共同导致血管收缩和组织缺血、缺氧。
(三)细胞机制
病因作用于机体后可以直接或间接作用于细胞，造成细胞的代谢、功能和结构改变，
引起细胞的向稳态调节紊乱。病因引起的细胞损伤可以是选择性的，也可以是非选择性
的。例如， HIV 感染选择性破坏T 淋巴细胞，导致机体免疫功能缺陷; 氧化物中毒时，氧
离子与细胞线粒体内细胞色素氧化酶结合(非选择性和高亲和性)，从而导致该酶失去活
性，阻断细胞内呼吸致细胞死亡。
(四)分子机制
细胞的结构、功能和生命活动都依赖于细胞内的分子，这些分子包括生物大分子物质和小分子物质。细胞内的生物大分子主要是蛋白质和核酸，细胞的骨架和生命活动过程主要由蛋白质调控和完成，生命的信息储存于核酸，蛋白质的合成由核酸指导完成。任何病因无论通过何种途径引起疾病，在疾病过程中最终都会表现出分子水平上的异常。细胞分子的异常变化必然会引起细胞代谢、功能和结构的改变，影响细胞正常生命活动，从而导致疾病的发生。如心肌细胞的肥大和重构可能由于机械牵拉和体液因子如儿茶酣胶、血管紧张素E 等增加，引起一系列的细胞内蛋白酶活性和表型的改变，细胞内钙离子升高，进而诱导mRNA 和蛋白质合成增加，导致心肌肥大和重构。
    人类基因组计划的完成提高了人类对生命和疾病的认识水平，如对糖尿病、高血压、肿瘤等常见病，可从分子、基因、蛋白质水平逐渐揭示其发病机制。很多疾病易感基因的发现，为阐明疾病发生的个体差异和疾病治疗的个性化提供了新的视野，基因治疗将成为未来人类治疗疾病的新方法。但人类基因组计划的完成，仅仅使人类破译了生命信息的密码，对于这些生命信息密码的生物学意义、表达的调控和协调等仍保持着神秘的面纱。而这些问题的回答才使疾病发病机制的揭示和基因治疗成为可能。后基因组时代的主要任务是解读基因调控，注释所有基因产物、基因与疾病的关系等，将对医学的发展产生革命性的推动。

(一)损伤与抗损伤
损伤与抗损伤是疾病发生、发展过程中的一对基本矛盾，贯穿于疾病的始终，也是决定疾病发展的基本动力。双方的力量对比决定疾病的发展方向和结局。在抗损伤反应占优势时，则疾病好转或痊愈;损伤强于抗损伤，则疾病发生并恶化。例如，机械性外伤引起的组织坏死时，血管破裂引起的出血、循环血量减少和血压下降等变化均属损伤性变
化，体内同时出现一系列抗损伤反应，包括交感神经兴奋、细小动脉收缩、心率加快和心输出量增加等，如果这些抗损伤反应和恰当的治疗能战胜损伤，机体可恢复健康。反之，如损伤较重，抗损伤的各种反应不能对抗损伤，又无恰当而及时的治疗，则病变进展、病情恶化。
损伤和抗损伤反应通常具有两重性并可相互转化。如细菌性腹泻，可以造成机体损伤引起脱水，同时也有抗损伤作用，即促进细菌排出体外;外伤出血，血管收缩有利于维持血压和减少出血，对机体具有保护作用，但血管长时间的收缩会加重组织的缺血、缺氧，从而加重组织器官损伤，说明抗损伤反应变成了损伤反应。因此，只有对损伤和抗损
伤的辨证认识，才能进行正确的判断和治疗。
(二)因果交替
因果交替是指在疾病的过程中，原始致病因素作用于机体后，机体产生一定的结果，这些结果又作为病因引起新的果。病因和结果间相互交替和相互转化可以推动疾病发展，甚至形成因果交替的恶性循环，使疾病进行性恶化， 直至患者死亡。因此，采取医学干预打断因果转化和恶性循环，才能使疾病向有利于康复的方向发展。
(三)局部和整体
任何疾病都有局部表现和全身反应。由于生物体是一个相互联系的有机整体，在疾病过程中，局部和整体相互影响和制约。例如，下肢的创伤，可以出现创伤部位的充血、水肿及炎症反应等局部反应，严重的创伤或全身抵抗力低下时，创伤的局部反应可以通过神经· 体液途径影响全身，可出现发热、寒战、乏力，甚至休克等全身性反应。反之，创伤较轻或全身抵抗力很强，这种局部损伤可被限制在局部范围一般不引起明显的全身性反应。同样，全身性疾病也常常出现局部改变，如AIDS 患者往往死于肺部感染，糖尿病患者局部的创伤迁延不愈而导致严重后果。因此，辩证地理解疾病的局部和整体关系，有助于抓住疾病的本质。

疾病发生的条件是指在病因作用于机体的前提下，影响疾病发生和发展的各种体内外因素。条件本身不能直接引起疾病，但是可以影响病因对机体的作用， 从而左右疾病的发生、发展，表现为促进或阻碍疾病的发生。例如，并不是接触结核杆菌的人全都会发生结核病，是否发病除与病因(结核杆菌)密切相关外，条件也起一定作用，如营养不良、居
住条件恶劣、过度疲劳等条件下使机体抵抗力降低， 结核杆菌便乘虚而入，就容易发生结核病;相反，充足的营养、良好的生活条件、适量的体育活动等， 都能增强机体对病原微生物的抵抗力，此时如有结核杆菌侵入，也可不发生结核病。由此可见，在疾病的病因学预防中，应该重视条件的作用。
诱因C precipitating factor) 是指疾病的条件中， 能加强病因作用或促进疾病发生、发展的因素。如娃振、发热、情绪激动等可诱发心力衰竭;大量高蛋白饮食、消化道出血等可
引发肝硬化患者出现肝性脑病。
很多疾病的发生与多种因素有关，其中有些因素难于区分其是病因还是条件， 人们
将这些因素称为危险因素(risk factor)。如高血脂、高血压、吸烟、糖尿病等是动脉粥样硬
化的危险因素。
疾病发生、发展中病因与条件是相对的，它们是针对某个具体的疾病来说的，对于不同的疾病，同一个因素可以是某-个疾病发生的病因，也可以是另一个疾病发生的条件。例如，寒冷是上呼吸道感染发生的条件，却是冻伤的病因。

以感染人类，可能还会出现新的或变异的病原体威胁人类健康。病原体的致病力强弱不仅取决于侵入机体的数量、侵袭力和毒力，还与机体的防御功能特别是免疫力密切相关。
(二)理化因素
物理因素有异常的温度、气压、机械力、电离辐射、紫外线和噪声等;化学因素有强酸、强碱、化学毒物或动植物毒性物质等。理化因素致病，主要由因素自身的强度或浓度、作用部位、持续时间等决定，发病原因往往比较明确，机体的防御功能对其发生影响不大。
(三)营养因素
糖类、蛋白质、脂肪、维生素、无机盐(饵、锅、钙、镇、磷、氯)等，某些微量元素(如铁、
氟、晒、锤、锦、腆等)以及膳食纤维素等是维持人体正常生命活动所必需的营养素，氧、水
是维持生命活动的基本物质。上述物质的摄人不足或过度都可以引起疾病。土壤缺腆导
致腆缺乏病; 生热营养素糖类、蛋白质、脂肪摄入不足可导致营养不良，摄人过剩可导致
肥胖及代谢性疾病;维生素B ，摄入不足引起脚气病;维生素D 和Ca2   缺乏可引起何倭病，
但摄人过度又可导致中毒。
(四)遗传性因素
遗传性因素是指生殖细胞基因的突变或染色体畸变等遗传物质的异常，而且异常遗传物质可传给子代。基因突变可导致相应蛋白质的结构和功能改变而引起疾病，如血友病、半乳糖血症、白化病等。染色体畸变所引起的先天性愚型、性染色体畸变导致的两性畸形等。某些遗传性因素可以提高个体对病因的敏感性，而使个体更易患病的现象称为
遗传易感性，其家族成员具有易患某种疾病的倾向，如精神分裂症、肥胖、糖尿病和肿瘤等。
(五)先天性因素
先天性因素指能够损害胎儿正常发育的有害因素。由先天性因素引起的疾病称为先天性疾病，如妇女娃振期病毒感染可引起先天性心脏病。先天性疾病一般是不会遗传的，但也有些先天性疾病可能存在遗传性，如唇裂、多指(趾)等。
(六)免疫因素
机体免疫反应低下、缺陷，免疫反应过强或产生自身免疫反应等免疫因素均可导致疾病发生。人类免疫缺陷病毒C human immunodeficiency virus , HIV) 感染后， 病毒侵人T 淋巴细胞，破坏T 淋巴细胞及其功能，引起获得性免疫缺陷综合征Cacquiredimmunodeficiency syndrome , AIDS); 异种血清蛋白(破伤风抗毒素等)、药物(青霉素等)所引起的过敏性休克;花粉、食物(虾、牛乳等)所引起的支气管哮喘;机体对自身抗原发生免疫反应并引起自身组织的损害，称为自身免疫性疾病Cautoi m mune disease) ，如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、慢性溃殇性结肠炎、慢性淋巴细胞性甲状腺炎等。
Ct) 心理、社会因素
随着医学模式由生物- 医学模式转变为生物- 心理· 社会医学模式，心理和社会因素在疾病发生和发展中的作用越来越受到重视，工作、学习所产生的心理压力、人际关系不良、焦虑、孤独和情绪异常以及重大自然灾害和生活事件的打击等，都可以通过一定的途径影响机体的功能、代谢和形态结构。如高血压、消化性愤殇、肿瘤及冠心病等， 其发生和发展与心理、社会因素密切相关。
综上所述， 引起疾病的病因是多种多样的，疾病的发生可以主要由一种病因引起， 也可以由多种病因同时作用或先后参与。在疾病发生、发展过程中病因作用机制是错综复杂的，因此对疾病的病因预防要具体分析和个性化防治。目前， 仍存在一些疾病的

ELISPOT法源自ELISA，又突破传统ELISA法，是定量ELISA技术的延伸和新的发展。两者都是检测细胞产生的细胞因子或其他可溶性蛋白，它们最大的不同在于：　　1.ELISA通过显色反应，在酶标仪上测定吸光度，与标准曲线比较得出可溶性蛋白总量。　　2.ELISPOT通过显色反应，在细胞分泌这种可溶性蛋白的相应位置上显现清晰可辨的斑点，可直接在显微镜下人工计数斑点或通过ELISPOT分析系统对斑点进行计数，1个斑点代表1个细胞，从而计算出分泌该蛋白的细胞的频率。　　3.由于是单细胞水平检测，ELISPOT比ELISA和有限稀释法等更灵敏，能从20万～30万个细胞中检出1个分泌该蛋白的细胞。　　4.捕获抗体为高亲和力、高特异性和低内毒素McAb，在研究者以刺激剂激活细胞时，不会影响活化细胞分泌细胞因子。　　临床应用　　非常广泛，如移植中排斥反应的预测、疫苗发展、Th1/Th2分析、自身免疫病研究、肿瘤研究、过敏性疾病研究、感染性疾病研究、抗原决定簇图谱分析、化合物和药物免疫学反应的筛选等。

亦称酶联免疫电转移印迹法（EITB）是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的技术，具有分析容量大、敏感性高、特异性强等优点，是检测蛋白质特性、表达与分布的一种最常用的方法。（Westernblot）　　原理第一阶段为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）。抗原等蛋白样品经SDS处理后带负电荷，在聚丙烯酰胺凝胶中从阴极向阳极泳动，分子量越小，泳动速度就越快。此阶段分离效果肉眼不可见（只有在染色后才显出电泳区带）。　　第二阶段为电转移。此阶段分离的蛋白质条带肉眼仍不可见。　　第三阶段为酶免疫定位。将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜（相当于包被了抗原的固相载体）依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用后，加入能形成不溶性显色物的酶反应底物，使区带染色。常用的HRP底物为3，3-二氨基联苯胺（呈棕色）和4-氯-1-萘酚（呈蓝紫色）。阳性反应的条带清晰可辨。并可根据SDS-PAGE时加入的分子量标准，确定各组分的分子量。

使组织抗原决定簇重新暴露，是免疫组织化学技术中的重要步骤。常用方法有：　　1.酶消化法无花果蛋白酶为轻度消化酶；胰蛋白酶为中度消化酶；胃蛋白酶为强消化酶。　　2.盐酸水解法操作中应注意掌握盐酸浓度、水解温度及水解时间，以最大限度暴露抗原而又不破坏抗原性为目的。　　3.微波法将石蜡切片置于缓冲液中，凭借微波辐射产生的高热效应及高速分子运动能量解开交联蛋白，暴露被掩盖的抗原决定簇。　　4.高压锅法利用加热暴露抗原，经济简单，适用于大批切片的加热处理。　　5.煮沸法也是利用热效应恢复抗原性。

免疫荧光组织化学技术是采用荧光素标记的已知抗体（或抗原）作为探针，检测待测组织、细胞标本中的靶抗原（或抗体），达到对抗原（或抗体）物质定位、定性和定量测定的目的。　　组织处理　　标本的类型：　　涂片和印片：血液、细菌培养物、脑脊液、体腔渗出液和细胞悬液等均可简单地涂抹在玻片上，干燥固定后就可用于荧光抗体染色。脑脊液、脏器（肝、脾、淋巴结等）、细菌菌落或尸体病变组织可把新鲜切面压印于玻片上做成印片，经固定后再染色。　　组织切片（最常用）：这是组织学和细胞学最常用的显微镜标本片。主要有以下两种：①冷冻切片：为了使抗原最大量地保存，首选的制片方法是冷冻切片，其优点是操作简单，组织的抗原性保存好，自发荧光较少，特异荧光强，同时适用于不稳定的抗原，缺点是组织结构欠清晰；②石蜡切片：是研究形态学的主要制片方法，它不但是观察组织结构的理想方法，而且可进行回顾性研究。其优点是组织细胞的精细结构显现清楚，但对抗原的保存量不如冷冻切片，并有组织自发荧光和非特异性荧光，需加酶消化处理。　　细胞培养标本：比如用Hep-2细胞或HeLa细胞培养，待细胞在玻片上形成单层，固定后用作抗核抗体等检测的抗原片。还可使细胞单层生长在玻片上，再用病毒或患者标本感染，然后固定，用荧光抗体染色法检测病毒。　　活细胞染色：检查淋巴细胞表面抗原以及免疫球蛋白受体、癌细胞表面抗原、血清中抗癌细胞抗体等，均可用活细胞荧光抗体染色法。当同时观察细胞表面两种抗原的分布和相互关系时，可用双标记法进行染色。　　标本的保存　　标本在固定干燥后，最好立即进行荧光抗体染色及镜检。如必须保存时，则应保持干燥，置4℃以下保存。一般细菌涂片或器官组织切片经固定后可保存1个月以上。但病毒和某些组织抗原标本抗原性丧失很快，数天后就失去其抗原性，需在－20℃以下保存。

免疫电子显微镜（IEM）技术是利用高电子密度的颗粒性标志物（如胶体金、铁蛋白等）标记抗体，或用经免疫组织/细胞化学反应能产生高电子密度产物者如辣根过氧化物酶标记抗体，在电子显微镜下对抗原抗体反应中的高电子密度标记的抗原（抗体）进行亚细胞水平定位的技术。　　标本制备的要求是既要保存良好的细胞超微结构，又要注意保持组织的抗原性。因此在组织固定与取材时选用固定剂不宜过强，在取材方面，免疫电镜技术较光镜免疫化学技术要求更迅速、精细。　　在免疫染色方面，又分为包埋前染色、包埋后染色和超薄切片免疫染色三种。　　1.包埋前染色优点是切片染色前不经过锇酸固定、脱水及树脂包埋等过程，抗原未被破坏，易于获得良好的免疫反应；可在免疫反应阳性部位定位做超薄切片，提高电镜下的检出率。特别适用于含抗原量较少的组织。　　2.包埋后染色优点是超微结构保存较好，方法简便，阳性结构有高度的可重复性，还能在同一张切片上进行多重免疫染色。但抗原活性在电镜生物样品处理过程中可能减弱，甚至丧失或者抗原性质发生改变。　　3.超簿切片免疫染色是将组织置于2.3mol/L蔗糖液中，以液氮速冻，在冷冻超薄切片机上切片，切片厚度可略厚于常规树脂切片。冷冻超薄切片由于不需经固定、脱水、包埋等步骤，直接进行免疫染色，所以抗原性保存较好，兼有包埋前和包埋后染色的优点。

T细胞表面主要的CD抗原：　　1.CD2　表达于全部人T细胞和NK细胞表面，因其能与绵羊红细胞（SRBC）结合，又称为绵羊红细胞受体。　　2.CD3　是一种多链的糖蛋白，表达于全部T细胞表面，是T细胞的表面标志，是TCR-CD3复合物的重要组成部分。　　3.CD4／CD8　CD4和CD8分子分别表达于外周血不同的T细胞亚群表面，是区分T细胞亚群的重要标志。表达CD4的主要是辅助性T细胞，表达CD8的主要是细胞毒性T细胞。　　其他表面标志：致有丝分裂受体、病毒受体。　　T细胞的主要亚群：　　辅助性T细胞（Th）：辅助性T细胞的典型表面标志是CD3＋CD4＋CD8－。已证明不同的辅助性T细胞株所产生的细胞因子不尽相同，因而认为体内至少存在两种辅助性T细胞（Th1，Th2）。研究表明，Th1主要分泌IL-2、IFN-γ或TNF-β等细胞因子辅助细胞免疫或参与迟发型超敏反应，本身具有明显的细胞毒作用；Th2主要分泌IL-4、IL-5、IL-6或IL-10等细胞因子辅助体液免疫，参与速发型超敏反应，但本身不具有明显的细胞毒作用。　　细胞毒性T细胞（CTL，Tc）：细胞毒性T细胞的典型表面标志是CD3＋CD4－CD8＋。与辅助性T细胞类似，细胞毒性T细胞也可以分泌细胞因子，而且不同的细胞株所产生的细胞因子也不尽相同，分泌细胞因子的特征与Th1和Th2十分相似，遂将细胞毒性T细胞再细分为Tc1与Tc2，Tc1与Tc2都有典型的细胞毒性效应。　　调节性T细胞（Treg）：目前认为调节性T细胞主要包括两个亚群，一种是CD4＋CD25＋调节性T细胞；另一种为CD8＋调节性T细胞，其主要包括CD8＋CD28－调节性T细胞和CD8＋Qa-1限制性的调节性T细胞。

B细胞活化后转化为浆细胞，分泌抗体，执行体液免疫功能。B细胞表面的膜免疫球蛋白（SmIg）、Fc受体、补体受体、EB病毒受体和小鼠红细胞受体是B细胞的重要表面标志，其中以SmIg为B细胞所特有，是鉴定B细胞可靠的指标。B细胞表面较特异的CD分子有CD19、CD20、CD21、CD22和CD23等，其中有些属全体B细胞共有的标志，而有些仅是活化B细胞特有，据此可用单克隆抗体，通过间接荧光免疫法、酶免疫组化法或流式细胞技术对其进行检测。　　B细胞的表面标志：膜免疫球蛋白（mIg）又称为BCR，表达于所有成熟的B细胞和大多数B细胞瘤的细胞表面，属于免疫球蛋白超家族原型，是B细胞最具特性的表面标志。mIg的主要作用是结合特异性抗原，故又称为抗原受体。成熟B细胞的mIg主要为mIgM和mIgD。

自然杀伤（naturekillercell，NK）细胞是参与机体免疫应答反应，特别是肿瘤免疫应答的重要淋巴细胞。由于NK细胞极少有表面受体，因此过去主要以检测NK细胞活性来了解NK细胞的功能。随着流式细胞仪的普及和单克隆抗体技术的发展，加之对NK细胞的生物学特性了解得更加深入，目前临床上常采用三色荧光标记单克隆抗体标记NK细胞，在流式细胞仪上进行计数分析。　　K细胞的表面标志：人类NK细胞表面标志主要以CD16、CD56来认定。CD16分子又称为低亲和性IgGFc受体，当IgG类抗体与靶细胞表面相应抗原表位特异性结合后，可通过其Fc段与NK细胞表面FcRⅢ结合，行使针对靶细胞的定向非特异性杀伤作用，也即NK细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用（ADCC）。

淋巴细胞表面标志检测是评价免疫功能的重要指标。由于淋巴细胞，特别是T淋巴细胞在执行免疫功能方面发挥多种作用，故有必要对各类淋巴细胞（淋巴细胞亚群）进行分析。如CD4／CD8比值。　　对CD4＋和CD8＋T细胞的测定，有助于免疫缺陷疾病、自身免疫性疾病和移植排斥反应的监测。CD4／CD8升高常见于自身免疫性疾病；而CD4／CD8降低常见于病毒感染、恶性肿瘤和再生障碍性贫血等。

主要用于细胞内细胞因子和细胞表面黏附分子的检测，通过特异性的荧光抗体染色，能简单、快速地进行单个细胞水平的细胞因子或黏附因子的检测，精确判断不同细胞亚群的细胞因子和膜分子的表达情况。　　检测细胞内细胞因子：　　1.分离和培养待检细胞　　--刺激剂　　--蛋白转运抑制剂：莫能霉素　　2.破膜与固定：Triton100；4%多聚甲醛　　3.封闭非特异性结合位点 即用含5%脱脂奶粉和钙、镁离子的PBS溶液，重悬已固定的细胞。　　4.染色与分析 即用荧光素标记的细胞因子特异性单克隆抗体做荧光抗体染色，用流式细胞仪分析荧光阳性细胞百分比和荧光强度。此外，若应用不同荧光素标记两种以上细胞因子的单克隆抗体，则可同时检测同一细胞内2种以上不同的细胞因子。　　应用此法还可区分具有不同分泌特性的细胞亚群，如Th1、Th2细胞等。

优点：　　①特异性高；　　②操作简便、快速，可操作性大大增加，容易推广和便于普查；　　③影响因素相对较少且容易控制，重复性好，方法容易标准化。　　缺点：　　①所测定的只是细胞因子的蛋白含量，与其生物活性不一定成正比；　　②测定结果与所用的抗体来源及亲和力有很大的关系；　　③敏感性相对较低，比生物活性法约低10～100倍，测定下限一般为100pg。

1.液流系统　由样本和鞘液组成。待测细胞被制备成单个细胞的悬液，经荧光染料标记的单克隆抗体染色后置入样品管中，在清洁气体压力下进入流动室形成样本流；鞘液是辅助样本流被正常检测的基质液，其主要的作用是包裹在样本流的周围，使其保持处于喷嘴中心位置以保证检测的精确性，同时又防止样本流中细胞靠近喷孔壁而堵塞喷孔。　　2.光学系统 由激光光源、分光镜、光束成形器、透镜组和光电倍增管组成。　　（1）激光光源：现代流式细胞仪采用的多为气冷式氢离子激光器，常用激光束波长为488nm，15mW。　　（2）分光镜：作用是反射较长波长的光，通过较短波长的光。　　（3）光束成形器：由两个十字交叉放置的圆柱形透镜组成。　　（4）透镜组：有3个透镜，作用是将激光和荧光变成平行光，同时除去离散的室内光。　　（5）滤片：长通滤片，允许长于设定波长的光通过；短通滤片，允许短于设定波长的光通过；带通滤片，允许一定带宽的波长通过，其他波长的光不能通过。　　（6）光电倍增管（PMT）：主要作用是检测散射光和荧光，同时将光学信号转换成电脉冲（数字数据）信号。　3.数据处理系统 主要由计算机及其软件组成，进行实验数据的分析、存储、显示，是流式细胞仪组成部件中的重要环节。

散射光信号的产生是细胞在液柱中与激光束相交时向周围360°立体角方向散射的光线信号，散射光的强弱与细胞的大小、形状、光学同性、胞内颗粒折射有关，与接收散射光的方向也有关。流式细胞仪中涉及的散射光信号分为前向散射光（FS）和侧向散射光（SS）。　　（一）前向散射光　　激光束照射细胞时，光以相对轴较小的角度（0.5°～10°）向前方散射讯号。在激光束正前方的检测器为前向散射光检测器，其收集的散射光信号又称为小角散射，对同一个细胞群体，FS信号的强弱与细胞的体积成正比，因此可以说FS是用于检测细胞或其他粒子物体的表面属性。　　（二）侧向散射光　　激光束照射细胞时，光以90°角散射的讯号。与激光束垂直方向的检测器为侧向光检测器，也称为90°散射光检测器。其收集的散射光信号主要由细胞的致密性及粒度折射产生，SS信号的强弱与细胞或其他颗粒形状及粒度成正比。SS用于检测细胞内部结构属性，可获得有关细胞内超微结构和颗粒性质的参数。

特征性免疫诊断指标表现为：T淋巴细胞总数减少，T细胞亚群CD4Th/CD8Tc比例倒置，Th/Tc＜1.0，Th细胞数量显著下降甚至测不出，而Tc细胞数量可正常或增加，NK细胞减少或活力下降，B淋巴细胞群则处于正常范围。　　自身免疫性疾病相关HLA抗原分析　　已有证据表明，有些疾病的发病常与一些类型的HLA抗原的检出有关。在这些疾病中，某些HLA抗原的检出率较正常人群中所检出者为高。最典型的疾病是强直性脊柱炎，其外周的HLA-B27的表达及表达程度与疾病的发生有很高的相关性。　　移植免疫中的应用　　FCM作为一个强大的技术平台，已应用于多个领域，其在移植免疫分析中的应用也越来越广泛。目前移植免疫中的FCM应用主要包括流式细胞术的交叉配型（FCXM）和群体反应性抗体（PRA）检测。